马流感（Equine Influenza）是由马流感病毒（EIV）引起的高度传染性呼吸道疾病，主要影响马、驴、骡等马科动物。其典型症状包括高热、咳嗽、流涕、食欲减退及运动能力下降，严重时可引发肺炎甚至死亡。由于病毒传播速度快，且易在密集饲养或赛事活动中暴发，及时准确的检测对于疫情控制、动物健康管理及国际贸易检疫至关重要。通过科学检测，不仅能早期发现感染个体，还能评估群体免疫水平，指导疫苗接种策略，最大限度减少经济损失。
针对马流感的检测主要涵盖以下几类项目：
1. 病毒分离与鉴定：通过采集鼻腔拭子、咽拭子或肺组织样本，接种鸡胚或MDCK细胞进行病毒培养，分离病毒后通过血凝试验（HA）、免疫荧光法（IFA）或PCR确认病毒亚型，是确诊的“金标准”。
2. 抗原检测：使用快速检测试剂盒（如胶体金试纸条）或ELISA技术直接检测样本中的病毒抗原，适用于现场快速筛查，但灵敏度略低。
3. 核酸检测：采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）或实时荧光定量PCR（qPCR）检测病毒RNA，具有高灵敏度和特异性，可区分不同病毒株（如H3N8、H7N7）。
4. 血清学检测：通过血凝抑制试验（HI）、病毒中和试验（VNT）或ELISA法检测血清中特异性抗体水平，用于评估免疫状态或追溯既往感染。
5. 临床症状监测：结合体温、呼吸频率、咳嗽频率等指标进行初步判断，需与其他呼吸道疾病（如马疱疹病毒感染）鉴别诊断。
根据检测目的和场景，常用方法包括：
1. 分子生物学方法：RT-PCR和qPCR可快速检测病毒核酸，适用于早期感染诊断；全基因组测序用于追踪病毒变异及溯源。
2. 免疫学方法：ELISA检测IgM/IgG抗体动态变化，HI试验用于评估疫苗免疫效果，操作简便但需双份血清对比。
3. 病毒培养法：需生物安全二级（BSL-2）实验室，周期较长（3-7天），但可获取活病毒用于进一步研究。
4. 快速诊断试剂盒：基于抗原-抗体反应的侧流层析技术，15分钟内出结果，适合基层单位或疫情应急使用。
全球范围内主要遵循以下标准：
1. 国际标准：世界动物卫生组织（WOAH/OIE）《陆生动物诊断试验手册》规定病毒分离、RT-PCR和HI试验为官方认可方法，要求检测实验室通过ISO/IEC 17025认证。
2. 样本采集规范：急性期采集鼻咽拭子（发病后1-3天），置于病毒运输培养基（VTM）中冷藏运送；血清样本需间隔14天采集双份，-20℃保存。
3. 结果判定：病毒分离阳性或PCR检测Ct值≤35为现症感染；HI抗体滴度≥1:40提示免疫保护，双份血清抗体4倍升高表明近期感染。
4. 疫苗效力评估：依据OIE指南，疫苗免疫后HI抗体应达到1:160以上，攻毒保护率需≥70%。
各国还根据本地流行毒株制定补充标准，例如欧盟要求进出口马匹需提供EIV阴性检测报告，美国则强制赛事马定期进行血清学监测。
